见解析
(1)用EcoRI酶切出的目的基因和质粒具有相同的黏性末端,如果放在一起加入DNA连接酶,则可出现三种连接结果,即会出现目的基因自身形成的连接物,载体自身形成的连接物和重组质粒,要通过筛选、纯化才能选出符合要求的DNA。(2)载体自身形成的连接物能重新形成完整的tetR基因,具有抗四环素的特点,其他连接物中tetR基因被限制性内切酶破坏,不再具有抗四环素的特点;在整个操作过程中,ampR基因保持完整,质粒自身形成的连接物和重组质粒都具有抗青霉素的特性。(3)RNA聚合酶与相关基因的启动子结合,完成的是转录过程。(4)将含有目的基因的靶DNA片段和载体分别用两个不同的限制性内切酶切割,使两种DNA片段自身的5′和3′黏性末端不同,但二者相同末端又互补,这明显减少靶DNA片段和载体自身环化与串连,使外源DNA片段能正确插入载体启动子下游。在本题中目的基因两端有EcoRI酶切点和BamHI酶切点,在质粒载体上也有这两种酶的切点,所以可以用这两种酶切出非同源性互补末端来阻止其他连接。