见解析
(1)DNA分子的每条单链上都有一个游离的磷酸基团,因此目的基因上有2个游离的磷酸基团,而质粒是环状DNA,没有游离的磷酸基团。
(2)在DNA分子结构中,核苷酸链中磷酸和脱氧核糖交替连接构成DNA分子的基本骨架。由图分析可知,SmaⅠ限制酶的切割位点在G和C两个碱基之间,因此切开的是胞嘧啶脱氧核苷酸和鸟嘌呤脱氧核苷酸之间相连的磷酸二酯键。
(3)由图可知,图一中SmaⅠ限制酶的切割位点在目的基因的中间,图二中SmaⅠ限制酶的切割位点在抗性基因上,用这种酶进行切割,目的基因与抗性基因都将被破坏,不可取。
(4)限制酶切割目的基因和质粒后,需用DNA连接酶将两者连接。但是连接的结果有多种:原质粒切割的粘性末端重新连接、目的基因的粘性末端自连接而成环状、目的基因与切割质粒形成重组质粒等。
(5)BamHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶切割形成的粘性末端不同,这可以防止切割的目的基因和质粒的粘性末端自身环化,只获得重组质粒。
(6)质粒上的抗生素抗性基因属于标记基因,如果在培养基中加入抗生素后能存活的大肠杆菌必定是含有重组质粒的细菌。