(8分)我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛，下图是利用基因工程方法生产人生长激素的示意图。pBR322质粒为基因工程中经常选用的载体，Ampr表示青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因，该质粒上有限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的识别和切割位点，如图（已知普通大肠杆菌中不含有pBR322质粒上任何基因；限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同）。回答问题：(1)过程②为，质粒上的抗性基因作用是。(2)为防止④过程中出现多种重组质粒，一般用两种限制酶分别对目的基因和质粒进行剪切，从而把目的基因和质粒各自剪切出 (不同／相同)的黏性末端。基因表达载体中目的基因除包含以上所描述的结构外，还必须含有。(3)如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ中的任意两种，同时对多个质粒pBR322进行切割，则形成的DNA片段共种；为提高⑤过程成功率，常用溶液处理大肠杆菌。(4)现在用限制酶PstI切割目的基因和质粒pBR322，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌先接种到甲培养基上，形成菌落后用无菌牙签挑取甲上的单个菌落，分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置，一段时间后，菌落的生长状况如上图所示。甲培养基上能生长的大肠杆菌中含有基因，与丙相比，乙培养基中少了两个菌落，说明丙培养基中这两个菌落中的大肠杆菌。试题及答案-解答题-云返教育

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(8分)我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛，下图是利用基因工程方法生产人生长激素的示意图。pBR322质粒为基因工程中经常选用的载体，Amp^r表示青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因，该质粒上有限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的识别和切割位点，如图（已知普通大肠杆菌中不含有pBR322质粒上任何基因；限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同）。回答问题：

(1)过程②为，质粒上的抗性基因作用是　。
(2)为防止④过程中出现多种重组质粒，一般用两种限制酶分别对目的基因和质粒进行剪切，从而把目的基因和质粒各自剪切出　 (不同／相同)的黏性末端。基因表达载体中目的基因除包含以上所描述的结构外，还必须含有　。
(3)如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ中的任意两种，同时对多个质粒pBR322进行切割，则形成的DNA片段共　种；为提高⑤过程成功率，常用　溶液处理大肠杆菌。
(4)现在用限制酶PstI切割目的基因和质粒pBR322，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌先接种到甲培养基上，形成菌落后用无菌牙签挑取甲上的单个菌落，分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置，一段时间后，菌落的生长状况如上图所示。甲培养基上能生长的大肠杆菌中含有　基因，与丙相比，乙培养基中少了两个菌落，说明丙培养基中这两个菌落中的大肠杆菌　。

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见解析

（1）过程②为逆转录，需要逆转录酶；质粒上的抗性基因作为基因工程的标记基因，作用是检测目的基因是否导入受体细胞。
（2）用两种限制酶分别对目的基因和质粒进行剪切，可以将目的基因和质粒各自剪切出不同的黏性末端。基因表达载体一般由启动子、目的基因、标记基因和终止子组成，所以除了上所描述的结构外，还必须含有启动子和终止子。
（3）PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ3种酶分别用1、2、3表示，其中任意两种酶酶切时，可得到1-2、2-1，2-3、3-2，1-3、3-1六种片段。⑤过程为转化，需要CaCl₂处理大肠杆菌，使之处于易于吸收周围环境中DNA的感受态。
（4）目的基因插入质粒后，破坏了氨苄青霉素抗性基因，但没有破环四环素抗性基因，因此含有重组质粒的大肠杆菌能在含有四环素的培养基上生长，但不能在含有氨苄青霉素的培养基上生长。甲、丙培养基中含有四环素，因此能在甲和丙中生长的大肠杆菌含有四环素抗性基因，包括导入普通质粒和重组质粒的大肠杆菌；乙培养基中含有四环素和青霉素，因此能在乙中生长的是导入普通质粒的大肠杆菌。与丙相比，乙培养基中少了两个菌落，说明丙培养基中这两个菌落中的大肠杆菌成功导入了重组质粒。

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选修3 浙科版解答题高中生物

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