见解析
(1)由于口蹄疫病毒的遗传物质为RNA,欲获得目的基因必须以RNA为模板合成DHA,该过程属于逆转录。
(2)由于两种限制酶切割出的末端不同,切出的质粒和目的基因不会自己连接成环状,在目的基因连接到切开质粒时也能保证插入部位和方向的准确性。
(3)原质粒(3.7kb)中EF段0.2kb、FH点0.5kb、GE段0.8kb,则HG段为2.2kb,依据重组质粒切割后的数据分祈,目的基因替换EF段后总长度为4.7kb,因此目的基因的长度为1.2kb。由于酶C切割后形成1.6kb和3.1kb两个片段,故目的基因中酶C的切点距离已知的切点G的距离为1.6kb,同理可以推知,酶D的切点距离已知的切点H的距离为1.2kb,根据原来酶C和酶D的两个切点之间的距离为0.8+0.5+1.2=2.5(kb),则目的基因内部的两个切点之间的距离为:1.2+1.6—2.5=0.3(kb),则可以在图上标出两个切点的位置。
(4)为了便于细菌吸收重组质粒,可以使用钙离子(氯化钙溶液)处理,使之成为感受态细胞。
(5)植物组织培养需加入生长素和细胞分裂素以调节分裂和分化;导入的重组质粒上有抗卡那霉素基因,可以在含卡那霉素的培养基上生存,因此培养基中添加卡那霉素可以筛选出导入重组质粒的细菌。
(6)利用PCR技术扩增法检测转基因番茄中是否有目的基因时,需要根据目的基因的核苷酸序列设计引物;由于其中的一种引物使用了31个,那么最后得到的子代DNA应该为32个,根据DNA复制的有关知识,可以推知共复制了5次。